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技術(shù)文章
檢測(cè)細(xì)胞凋亡
點(diǎn)擊次數(shù)：1078 發(fā)布時(shí)間：2016-4-1
Annexin V是檢測(cè)細(xì)胞凋亡的靈敏指標(biāo)之一。在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，細(xì)胞膜上的磷脂酰絲氨酸（PS）由質(zhì)膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)，而Annexin V與PS有高度的親和力，可以與暴露在細(xì)胞外側(cè)的PS結(jié)合。在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，PS的外翻要早于細(xì)胞核的改變，因此與DNA碎片檢測(cè)比較，使用Annexin V可以更早的檢測(cè)到細(xì)胞的凋亡。但是細(xì)胞死亡時(shí)也會(huì)發(fā)生PS的外翻，所以Annexin V常與鑒定細(xì)胞死活的核酸染料PI結(jié)合使用來區(qū)分凋亡細(xì)胞（Annexin V+/PI-）和死亡細(xì)胞（Annexin V+/PI+）。
操作步驟：
1. 用不含EDTA的0.25%胰酶消化各組細(xì)胞，收集后1000rpm離心5min，PBS重懸。
2. PBS將細(xì)胞潤(rùn)洗2次，1500rpm離心5min。
3. 各組樣品分別依次加入500μL Binding Buffer，5μL Annexin V-FITC，5μL PI，混勻，室溫避光反應(yīng)5~15min。
4. 流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)，CELLQuest軟件獲取和分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。