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植物組織樣本的前處理
點(diǎn)擊次數(shù)：1352 發(fā)布時間：2016-8-17
一、勻漿介質(zhì)
一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據(jù)樣本及測定指標(biāo)的情況自行設(shè)定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境。
二、組織勻漿的制備
1、取組織塊（0.2g～0.5g）zui少可到5～10mg在冰冷的PBS中漂洗，濾紙拭干，準(zhǔn)確稱重，放入5ml的勻漿管中。
2、按重量(g):體積(ml)=1:4的比例加入4倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中，冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。
3、勻漿的方式：手工勻漿，機(jī)器勻漿。
① 手工勻漿：左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉(zhuǎn)動研磨數(shù)十次（6～8分鐘），充分研碎，制成20%的勻漿液。
② 機(jī)器勻漿：用組織搗碎機(jī)10000～15000 轉(zhuǎn)/分 上下研磨制成20%組織勻漿，也可用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備（勻漿時間10秒/次，間隙30秒，連續(xù)3～5次，在冰水中進(jìn)行,可適當(dāng)延長勻漿時間），
鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片（直接涂片、染色均可以），顯微鏡下觀察細(xì)胞是否破碎，若沒有則可延長勻漿時間。
4、將制備好的20%勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)4000轉(zhuǎn)/分左右,離心10～15分鐘，取上清液進(jìn)行測定.
三、樣本保存:
植物組織樣本暫時不測定，可立即低溫凍存，溫度越低越好，中間如*凍融，-20℃以下可保存三個月,-70℃以下可保存六個月。
制備好的勻漿液建議不要凍存,當(dāng)天進(jìn)行測定,如放置時間過長相關(guān)酶活會有所下降,部分指標(biāo)4℃可存放3～5天(如SOD要存放2～3天,MDA可存放3～5,總蛋白測定可存5～7天等)