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抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0225
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：
提取液：临用前将粉剂一倒入提取液中，溶液为悬浊液，摇匀使用即可，2-8℃可以保存12周。
试剂二：临用前加10 mL蒸馏水充分溶解。4℃可以保存1周。（由于试剂稳定性较差，故多给一瓶）
试剂三：使用前先离心。临用前根据样本量取适量试剂三用蒸馏水稀释100倍使用即可。
产品说明：
    APX（EC.1.11.1.11）是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX具有多种同功酶，分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体，以及过氧化体和类囊体膜上。APX催化H₂O₂氧化AsA，是植物AsA的主要消耗者。APX的活性直接影响到AsA的含量，APX与AsA具有一定的负相关性。
APX催化H₂O₂氧化AsA，通过测定AsA氧化速率，来计算得APX活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
    紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、低温离心机、移液枪、水浴锅、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
实验实例：

1. 取0.1g小蓟样本加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清，之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算ΔA空白管=A1_空白管-A2_空白管=0.5453-0.5287=0.0166，ΔA测定管=A1_测定管-A2_测定管=0.7097-0.6137=0.096，按样本质量计算酶活：

APX活性（U/g 质量）=1.79×(ΔA测定管-ΔA空白管) ÷W=1.79×（0.096-0.0166）÷0.1=1.421 U/g 质量。
相关发表文献：

1. Meng C, Quan T Y, Li Z Y, et al. Transcriptome profiling reveals the genetic basis of alkalinity tolerance in wheat[J]. BMC genomics, 2017, 18(1): 24.

2. Qin Y, Djabou A S M, An F, et al. Proteomic analysis of injured storage roots in cassava (Manihot esculenta Crantz) under postharvest physiological deterioration[J]. PloS one, 2017, 12(3).

3. Zhang Z, Liu H, Sun C, et al. A C2H2 zinc-finger protein OsZFP213 interacts with OsMAPK3 to enhance salt tolerance in rice[J]. Journal of plant physiology, 2018, 229: 100-110.

4. Zhao Y, Yu W, Hu X, et al. Physiological and transcriptomic analysis revealed the involvement of crucial factors in heat stress response of Rhododendron hainanense[J]. Gene, 2018, 660: 109-119.

5. Djabou A S M, Qin Y, Thaddee B, et al. Effects of Calcium and Magnesium Fertilization on Antioxidant Activities during Cassava Postharvest Physiological Deterioration[J]. Crop Science, 2018, 58(3): 1385-1392.

参考文献：

1. Shigeoka S, Nakano Y, Kitaoka S. Metabolism of hydrogen peroxide in Euglena gracilis Z by L-ascorbic acid peroxidase[J]. Biochemical Journal, 1980, 186(1): 377.

2. Caverzan A, Passaia G, Rosa S B, et al. Plant responses to stresses: role of ascorbate peroxidase in the antioxidant protection[J]. Genetics and molecular biology, 2012, 35(4): 1011-1019.

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