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植物花色苷含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
货号：BC1380
规格：50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

产品说明：
花色苷是一类可食用的易溶于水等溶剂的天然色素?；ㄉ帐怪参锍氏侄嗖实难丈?，本身更具有多种保健作用，因而在天然食用色素、保健品和医药行业都有着广阔的应用前景。


根据花色苷在不同pH下的结构性质测定花色苷含量，在pH为1时花色苷在530nm处有最大吸收峰,而当pH为4.5时，花色苷转变为无色查尔酮形式在530nm处无吸收峰，通过测定不同pH下的530nm和700nm处的吸光度值计算样本中花色苷的含量。
 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
按照样本质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10的比例（建议称取约 0.1g样本，加入1mL提取液），充分匀浆后转移到EP管中， 封口膜封口防止挥发，60℃浸提30min，期间可震荡数次，提取后提取液定容至1mL。12000rpm，常温离心10min，取上清液待测。
二、测定步骤

1. 可见分光光度计预热30min以上，蒸馏水调零。

2. 加样表：

充分混匀后测定测定管1和测定管2分别在530nm和700nm处的吸光度，测定管1在530nm和700nm处的吸光值记为A1、A1’，测定管2在530nm和700nm处的吸光值记为A2、A2’，计算ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）。

三、花色苷含量计算

1. 按样本质量计算

花色苷含量（μmol/g 质量）=[ΔA÷(ε×d)×10³×F] ×V提取÷W=0.037×ΔA×F÷W

1. 按样本蛋白浓度计算

花色苷含量（μmol/mg prot）=[ΔA÷(ε×d)×10³×F] ×V提取÷(Cpr ×V提取)=0.037×ΔA×F÷Cpr
F：稀释倍数，该反应体系下为10；d：比色皿光径，1cm；W：样本质量，g；ε：花色苷的摩尔消光系数，2.69×10⁴mL/mmol/cm；V提?。禾崛∫鹤芴寤?，1mL；10³：单位换算系数，1mmol=10³μmol；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL（蛋白浓度需用PBS单独提取后自行测定）。
注意事项：

1. 如果A1大于1，可以适当加大稀释倍数，保证总体积1mL不变，如50μL上清液和950μL试剂一（相当于稀释20倍）；如果A1小于0.1，可以适当缩小稀释倍数，保证总体积不变，如500μL上清液和500μL试剂一（相当于稀释 2 倍），使A1保持在0.1~1范围内，可提高检测灵敏度；注意应同样调整上清液和试剂二体积比例；计算时以实际稀释倍数代入计算公式中。

2. 因提取液会使蛋白变性，若使用蛋白浓度计算需用PBS单独提取后自行测定。

实验实例：

1. 取0.1g西梅皮加入1mL提取液充分匀浆后转移到EP管中，封口膜封口防止挥发，60℃浸提30min，期间可震荡数次，提取后提取液定容至1mL，离心取上清后按照测定步骤操作，测得计算ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）=（0.249-0.101）-（0.133-0.065）=0.08，按样本质量计算含量得：花色苷含量（μmol/g质量）=0.037×ΔA× F÷W =0.037×0.08×10÷0.1=0.296 μmol/g 质量。

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