目录:北京索莱宝科技有限公司>>生化检测试剂盒-常量法>>脂肪酸代谢系列>> BC4240-50T/48SATP-柠檬酸裂解酶活性检测试剂盒 脂肪酸
| CAS | 详询 | 纯度 | 详询 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 详询 | 分子式 | 详询 |
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 50T/48S |
| 货号 | BC4240 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农林牧渔,综合 |
| 主要用途 | ATP-柠檬酸裂解酶活性检测 |
ATP-柠檬酸裂解酶（ACL）活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC4240
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液一 | 液体60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液体0.6 mL×1支 | -20℃保存 |
试剂一 | 液体60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1支 | -20℃保存 |
试剂三 | 粉剂×1瓶 | -20℃保存 |
试剂四 | 粉剂×1支 | -20℃保存 |
试剂五 | 粉剂×1支 |
溶液的配制：
1、 提取液二：为易挥发试剂，用完后尽快密封，-20℃保存；
2、 试剂二：临用前加入1.3 mL试剂一溶解；用不完的试剂可分装后-20℃保存4周，避免反复冻融；
3、 试剂三：临用前加入6 mL试剂一溶解；用不完的试剂可分装后-20℃保存4周，避免反复冻融；
4、 试剂四：临用前加入1 mL试剂一溶解；用不完的试剂可分装后-20℃保存4周，避免反复冻融；
5、 试剂五：临用前加入0.5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂可分装后-20℃保存4周，避免反复冻融；
6、 试剂五工作液：根据样本量按照试剂五：蒸馏水=0.025mL：0.8mL（共0.825mL，约16T）的比例进行配制，现用现配，当天用完；
7、 提取液的配制：按提取液一︰提取液二=990︰10（V︰V）的比例配制，根据样本量现配现用，禁止将提取液二一次性全部加入提取液一混匀分装待用。
产品说明：
ATP-柠檬酸裂解酶（ATP-citrate lyase，ACL）是催化柠檬酸生成乙酰*酶A的关键胞质酶，其催化产生的乙酰*酶A是合成脂肪酸与胆*醇等脂类物质的主要原料，并可参与相关重要蛋白的修饰作用，是体内能源物质代谢的枢纽性物质。
在ATP和*酶A存在的情况下，ACL能将柠檬酸催化裂解为乙酰*酶A、草酰乙酸、ADP和磷酸盐，苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+，导致340nm处光吸收下降。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、天平、台式低温离心机、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、水浴锅/恒温培养箱、冰、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：按照质量（g）︰提取液体积(mL)为1︰5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。于4℃，8000g离心10min，取上清，置于冰上待测。
2、细胞或细菌：按照细胞或细菌数量（104个）︰提取液体积（mL）为500~1000︰1的比例（建议500万细胞或细菌加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞或细菌（功率300W，超声3秒，间隔7秒，总时间3min），于4℃，8000g离心10min，取上清，置于冰上待测。
3、血清（浆）或其他液体：直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、 将试剂一置于37℃水浴10min。
3、 操作表 (在1mL石英比色皿中依次加入下列试剂) ：
试剂名称 | 测定管 | 空白管 |
试剂一（µL） | 760 | 760 |
试剂二（µL） | 20 | 20 |
试剂三（µL） | 100 | 100 |
试剂四（µL） | 20 | 20 |
试剂五工作液（µL） | 50 | 50 |
样本（µL） | 50 | - |
蒸馏水（µL） | - | 50 |
在1mL石英比色皿中分别加入上述试剂，充分混匀后于340nm处测定10s时的吸光值A1，迅速置于37℃环境反应2min，拿出迅速擦干测定130s时的吸光值A2，计算ΔA测定管=A1测定-A2测定，ΔA空白管=A1空白-A2空白，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管（空白管只需做1-2次）。 | ||
注意：如果样本量大，可按试剂一︰试剂二︰试剂三︰试剂四︰试剂五工作液=760︰20︰100︰20︰50的比例配制成工作液使用，工作液应根据样本量现配现用。
三、ACL活性计算
1. 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg蛋白每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位
ACL活性（U/mg prot）=[ΔA×V反总×109÷（ε×d）]÷(V样×Cpr) ÷T=1607.7×ΔA÷Cpr
2. 按样本质量计算
单位定义：每g组织每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
ACL活性（U/g 质量）=[ΔA×V反总×109÷（ε×d）]÷(W ×V样÷V样总)÷T=1607.7×ΔA÷W
3. 按照细胞数量计算
单位定义：每1万个细胞或细菌每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
ACL活性（U/104 cell）=[ΔA×V反总×109÷（ε×d）] ÷(N×V样÷V样总) ÷T=1607.7×ΔA÷N
4. 按液体体积计算
单位定义：每mL液体每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。
ACL（U/mL）=[ΔA×V反总×109÷（ε×d）]÷V 样÷T=1607.7×ΔA
V反总：反应总体积，1×10-3 L；109：单位换算系数，1mol=109nmol；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL，蛋白浓度自行测定；W：样本质量，g；N：细胞或细菌数量，以万计；T：反应时间，2min。
实验实例：
1. 取0.1g黑麦草，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，于4℃，8000g离心10min，取上清，按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定管= A1测定-A2测定=1.549-1.512=0.037，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.411-0.41=0.001，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.037-0.001=0.036，按样本质量计算得：
ACL活性（U/g 质量）=1607.7×ΔA÷W=578.772 U/g 质量。
2. 取0.1g肝脏组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，于4℃，8000g离心10min，取上清，按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定管= A1测定-A2测定=1.165-0.985=0.179，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.411-0.41=0.001，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.179-0.001=0.178，按样本质量计算得：
ACL活性（U/g 质量）=1607.7×ΔA÷W=2861.706 U/g 质量。
相关系列产品：
BC0750/BC0755 乙醛脱氢酶（ALDH）活性检测试剂盒
BC0410/BC0415 乙酰*酶A羧化酶（ACC）活性检测试剂盒
BC1980/BC1985 总胆*醇（TC）含量检测试剂盒
ATP-柠檬酸裂解酶活性检测试剂盒 脂肪酸 ATP-柠檬酸裂解酶活性检测试剂盒 脂肪酸
16
化工仪器网