人视网膜微血管内皮细胞采用胶原酶-混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，人视网膜微血管内皮细胞分离自视网膜组织；视网膜居于眼球壁的内层，是一层透明的薄膜。视网膜由色素上皮层和视网膜感觉层组成，两层间在病理情况下可分开，称为视网膜脱离。色素上皮层与脉络膜紧密相连，由色素上皮细胞组成，它们具有支持和营养光感受器细胞、遮光、散热以及再生和修复等作用。组织学上视网膜分为10层，由外向内分别为：色素上皮层、视锥、视杆细胞层、外界膜、外颗粒层、外丛状层、内颗粒层、内丛状层、神经节细胞层、神经纤维层、内界膜。视网膜内层为衬于血管膜内面的一层薄膜，有感光作用；后部鼻侧有一视神经乳头。视网膜上的感觉层是由三个神经元组成。神经元是视细胞层，专司感光，它包括锥细胞和杆细胞。视杆细胞主要在离中心凹较远的视网膜上，而视锥细胞则在中心凹处最多。第二层叫双节细胞，约有10到数百个视细胞通过双节细胞与一个神经节细胞相联系，负责联络作用。第三层叫节细胞层，专管传导。视网膜是一层菲薄的但又非常复杂的结构，它贴于眼球的后壁部，传递来自视网膜感受器冲动的神经纤维跨越视网膜表面，经由视神经到达出口。视网膜的分辨力是不均匀的，在黄斑区，其分辨能力。它是组成血管腔面单层扁平上皮样细胞，它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等有重要作用，在视网膜血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义。由于从不同的组织和器官获得的内皮细胞具有不同的特性，在脑和视网膜中，这些内皮细胞具有内屏障的功能，在调节血管生理状态，释放血管活性物质以及新生血管的形成中发挥着重要作用，体外分离培养RCEC对研究视网膜血管性疾病发生发展的病理生理机制以及疾病的早期防治具有重要临床意义。视网膜血管的生成是由内皮细胞、外膜细胞、星形胶质细胞产生的各种正负调节因子产生平衡而成。大部分致盲性疾病如糖尿病视网膜病、早产儿视网膜等都与血管生成有关。人视网膜微血管内皮细胞病变的主要生理变化有视网膜炎症、视网膜动脉硬化以及视网膜出血。

1.吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；

3.用吸管轻轻吹打混匀，按1:2比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4.待细胞贴壁后，培养观察；之后每2-3天换液一次新鲜的培养基。

备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考

客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以技术服务电话： 按 2，我们随时给予解答。

1.培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2.在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

3.传代培养过程中，消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。