高效液相色譜（High-performance liquid chromatography, HPLC） 是一種色譜分析技術(shù)，依賴于泵加壓后色譜柱中填充物對(duì)于樣品中各組分吸附力的不同，從而實(shí)現(xiàn)各組分快速的分離。

HPLC可以實(shí)現(xiàn)絕大部分物質(zhì)的分離鑒定。液相色譜的誕生，源于氣相色譜對(duì)于高沸點(diǎn)有機(jī)物分析，如蛋白質(zhì)、核酸等不易氣化的大分子物質(zhì)的局限性。自1980年代，隨著適用于分離蛋白質(zhì)和其它生物大分子的色譜柱進(jìn)入市場(chǎng)以來，HPLC開拓了它在生物化學(xué)的應(yīng)用領(lǐng)域。HPLC是目前應(yīng)用比較廣的分析技術(shù)，質(zhì)譜作為分離技術(shù)與HPLC競(jìng)爭的同時(shí)又可以在多方面互補(bǔ)使用，如LC-MS。迪信泰檢測(cè)平臺(tái)使用高效液相色譜的方法，可實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品進(jìn)行鑒定，可高效、精準(zhǔn)的進(jìn)行定量分析。

HPLC分離原理：固定相是固體吸附劑，吸附劑是多孔性微粒物質(zhì)，表面有吸附中心。樣品組分與流動(dòng)相競(jìng)爭吸附中心。各組分的吸附能力不同，使組分在固定相中產(chǎn)生保留時(shí)間不同，從而實(shí)現(xiàn)分離。
 

高效液相色譜常用檢測(cè)器

(1)紫外可見分光檢測(cè)器(UVD)。
(2)雙光路雙流路紫外/熒光檢測(cè)器(UV/FLD-1)。
(3)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)。
(4)液相色譜-液相色譜聯(lián)用(HPLC-HPLC)。
 

HPLC檢測(cè)原理圖

高效液相色譜法的特點(diǎn)

應(yīng)用范圍廣：70%以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜法分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差的化合物；
分離效率高：可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到好的分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍；
分離速度快：通常分析一個(gè)樣品在15～30 min，有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成；
靈敏度高：紫外檢測(cè)器靈敏度可達(dá)0.01ng；
能同時(shí)分離多種物質(zhì)：一根柱子能同時(shí)分離的成份可達(dá)100種；
樣品量少、容易回收：進(jìn)樣量在μL數(shù)量級(jí)，而且樣品經(jīng)過色譜柱后不會(huì)被破壞，可以收集單一組分或做制備。
 

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