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實驗沒思路，小 M 來相伴！小伙伴們，我又來啦~今天小M 帶大家一起來了解外泌體！ 外泌體 (Exosome) 是直徑約為 30-150 nm 的細胞外囊泡，具有脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)。外泌體參與細胞之間的交流和物質(zhì)的運輸，還與疾病的產(chǎn)生有關(guān)。

主題直播
細胞在正常及病理狀態(tài)下分泌外泌體，封裝的 DNA、RNA、脂質(zhì)、代謝物以及蛋白質(zhì)作為生理和病理信息傳遞給受體細胞，參與到機體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、腫瘤侵襲等方面。那么外泌體的各種分離方法有什么優(yōu)缺點？外泌體如何結(jié)合不同的組學(xué)技術(shù)探究相關(guān)分子機制？

5 月 28 日 14:00 MCE 主題直播間，小 M 將詳細介紹外泌體的分離方法、表征鑒定和示蹤技術(shù)，并對當(dāng)前外泌體在疾病機制中的課題思路進行概述。更多精彩分享，盡在直播間~

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? 外泌體的分離技術(shù)

外泌體來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。外泌體含有豐富的內(nèi)含物 (包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等)，參與細胞間的分子傳遞。外泌體常見的分離方法有：超速離心法、密度梯度離心法、色譜法、免疫分離法、超濾法和聚合物沉淀法。

圖 1. 外泌體的生物標記物和內(nèi)容物^[1]。
? 外泌體的表征鑒定

分離富集之后，我們又該如何鑒定提取出來的物質(zhì)是外泌體呢？根據(jù)國際細胞外囊泡研究協(xié)會 (ISEV) 提出的 MISEV 2018 指南，外泌體鑒定包含 3 個標志：透射電鏡、粒徑和蛋白標志物。透射電鏡鑒定外泌體形態(tài)；粒徑分析鑒定外泌體大小，蛋白標志物則通常通過 Western Blot 鑒定。

? 熒光成像外泌體示蹤技術(shù)

親脂性染料能夠?qū)ν饷隗w進行標記，親脂性染料主要包括兩類，一是 PKH67 (綠色) 和 PKH26 (紅色熒光)，由于它們可以與外泌體的脂質(zhì)雙層膜穩(wěn)定結(jié)合，所以染色效果較好，應(yīng)用較廣泛。二是 DiL(橙色熒光)、DiO (綠色熒光)、DiD (紅色熒光)、DiR (深紅色熒光)。其中 DiR 的紅外熒光可穿透細胞和組織，在活體成像中用來示蹤。

圖 2. MNNG/HOS 和 U-2OS 細胞攝取 PKH 標記的外泌體實驗^[2]。

好禮享不停~

[1] Hade MD, Suire CN, Suo Z. Mesenchymal stem cell-derived exosomes: Applications in regenerative medicine. Cells. 2021 Aug 1;10(8):1959.

[2] Yang H, He C, Feng Y, Jin J. Exosome?delivered miR?486?3p inhibits the progression of osteosarcoma via sponging CircKEAP1/MARCH1 axis components. Oncol Lett. 2023 Nov 16;27(1):24.